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II. Mamíferos transgénicos

Como se indicaba anteriormente, las investigaciones llevadas a cabo a principio de los años ochenta no fueron más que el lanzamiento de una serie ininterrumpida de avances, tanto en la investigación básica como en la utilización práctica de los animales transgénicos. En el cuadro adjunto se incluyen los principales hitos relacionados con la obtención y desarrollo de los mamíferos transgénicos:

MAMÍFEROS TRANSGÉNICOS: ANTECEDENTES Y CRONOLOGÍA

1938:

Spemann propone experimento de transferencia nuclear

1949:

Hammond mantiene embriones de ratón en cultivo in vitro

1961:

Tarkowski obtiene ratones quiméricos agregando embriones

1966:

Lin describe la técnica de microinyección de embriones de ratón

1980:

Gordon, Ruddle y col. obtienen los primeros ratones transgénicos por microinyección de ADN en el pronúcleo de cigotos de ratón

1981

Gordon y Ruddle obtienen ratones transgénicos por microinyección de ADN en el pronúcleo de cigotos de ratón

1981:

Evans y Kaufman obtienen células embrionarias totipotentes de ratón

1982:

Palmiter y col. obtienen ratones transgénicos gigantes mediante transgenes de la hormona del crecimiento de la rata

1983

Palmiter y col. obtienen ratones transgénicos gigantes mediante transgenes de la hormona de crecimiento humana

1983:

McGrath y Solter desarrollan una nueva técnica para experimentos de transferencia nuclear en ratón

1985:

Hammer y col. obtienen animales de granja transgénicos (conejos, ovejas, cerdos) con el transgén de la hormona del crecimiento humano

1987:

Thomas y Capecchi obtienen los primeros ratones knockout por recombinación homóloga

1989

Clark y col. obtienen ovejas transgénicas con el gen humano del factor IX de coagulación de la sangre mediante microinyección de ADN en el pronúcleo del cigoto

1991

Wright y col. obtienen ovejas transgénicas con el gen humano de la a -1-antitripsina mediante microinyección de ADN en el pronúcleo de cigotos

1991

Ebert y col. obtienen cabras transgénicas con el gen AtPH humano (activador tisular de plasminógeno) mediante microinyección de ADN en pronúcleo de cigoto

1991

Krimpenfort y col. obtienen vacas transgénicas con el gen humano de la lactoferrina mediante microinyección de ADN en el pronúcleo de cigotos

1993:

Nagy y Rossant obtienen ratones quiméricos por co-cultivo de embriones

1993:

Schedl y col. obtienen ratones transgénicos con cromosomas artificiales de levaduras

1994:

Brinster y col. obtienen ratones transgénicos por transplante de espermatogonias

1996:

Campbell y col. obtienen ovejas clónicas por transferencia nuclear de células embrionarias en cultivo

1997:

Wilmut y col. obtienen ovejas clónicas por transferencia nuclear de células diferenciadas fetales y adultas en cultivo

1997:

Schnieke y col. obtienen ovejas clónicas transgénicas por transferencia nuclear a partir de células fetales diferenciadas

1998:

Cibelli y col. obtienen vacas clónicas transgénicas por transferencia nuclear a partir de células fetales diferenciadas

1999

Baguisi y col. obtienen cabras transgénicas por transferencia nuclear

1999

Yanagimachi y col. obtienen ratones transgénicos mediante la co-inyección de cabezas de espermatozoides y ADN exógeno



1. Técnicas de obtención

Las técnicas de obtención de animales transgénicos son:

  • Microinyección de ADN en núcleo de ovocito

  • Microinyección de ADN en pronúcleo o en citoplasma de cigoto (óvulo fecundado)

  • Electroporación de cigoto

  • Transfección de células totipotentes

  • Co-inyección en ovocitos de una mezcla de cabezas de espermatozoides y ADN exógeno

  • Vectores virales

  • Transfección de gametos

  • Transferencia de núcleos transfectados (clonación)
    (veáse Fig. 1)

 

2. PROBLEMAS DE LA TRANSGÉNESIS

La introducción de una nueva información genética (el transgén) dentro del genoma de un organismo puede presentar algunos problemas en relación a dónde y cuándo expresar el transgén, tal como se indica a continuación:

  • Integración múltiple (en tándem o no)

  • Lugar de integración indeterminado (efecto de posición)

  • Metilación y falta de expresión

  • Mosaicismo (germinal y somático)

  • Expresión específica/ectópica

  • Expresión variable

  • Expresión variable dentro de líneas (variegación)

En cualquier caso, el ideal sería poder dirigir con total precisión el lugar de integración del transgén. Así, por ejemplo, en 1999 se obtuvieron en el Roslin Institute de Edinburgo las ovejas transgénicas "Cupid" y "Diana" a partir de la clonación de cultivos celulares modificados mediante recombinación homóloga ("gene targeting").