II. Aspectos científicos
1. ¿Qué ADN se analiza?
ADN cromosómico (genómico): ADN repetido en tandem
o VNTR (acrónimo inglés por Variable Number of Tandem
Repeats), que puede ser:
-
Minisatélite o MVR (minisatellite variant repeats):
secuencia de unas 30 pb (pares de bases).
-
Microsatélite o STR (short tandem repeats): secuencia
de 2 a 6 pb, normalmente 4. Por ejemplo, la secuencia ACTTACTTACTT
... ACTT puede aparecer repetida 8 veces en un locus y 12
veces en otro locus. Así, un individuo puede ser homocigoto
8-8, heterocigoto 8-12 u homocigoto 12-12.
ADN mitocondrial (ADN mt): Presenta herencia materna y es más
estable que el ADN cromosómico. Se suelen analizar dos
regiones hipervariables del "lazo D".
Polimorfismo del cromosoma Y: Se analizan microsatélites
(STRs) y el polimorfismo de nucleótidos simples (SNPs).
2. Análisis del poliformismo
- Sondas multilocus:
La historia de las aplicaciones forenses de los polimorfismos
de ADN se inició en 1984 cuando Weller y colaboradores
descubrieron en un intrón del gen humano de la mioglobina
la existencia de una región hipervariable constituida
por cuatro repeticiones en tandem de una secuencia de 33 pares
de bases (minisatélite). Al año siguiente, Jeffreys
y colaboradores (1985 a) encontraron que dicha región
hipervariable aparecía con ligeras modificaciones en
otros genes, diseñando sondas de ADN (sondas multilocus)
que permitían identificar simultáneamente muchas
de dichas regiones hipervariables. Este hecho les llevó
a pensar que dichos patrones de minisatélites multilocus
detectables por la sonda serían característicos
de cada individuo, constituyendo algo así como su "huella
dactilar de ADN" (DNA fingerprint) (Jeffreys y col.,
1985 b). Sin embargo, debido a la dificultad de estandarización
de la técnica y de la creación de bases de datos,
así como a los problemas de interpretación bioestadística
de los resultados, esta metodología tuvo una escasa
utilización.
- Sondas de locus único (SLPs, single locus probes):
La técnica permite detectar loci minisatélites
únicos bajo condiciones de hibridación molecular
muy restrictivas. Se utiliza principalmente en investigaciones
de paternidad porque identifica loci minisatélites
muy informativos. Para validar estas técnicas fue necesario
estandarizar las enzimas de restricción utilizadas
para fragmentar el ADN (en Europa se eligió en principio
la enzima Hinf I), así como las sondas que reconocen
los loci minisatélites muy variables (con más
del 90% de heterocigosis). Los individuos se caracterizan
por el tamaño de los RFLPs y no por el número
de repeticiones.
Es una técnica muy usada en criminalística porque
se puede realizar a partir de cantidades muy pequeñas de
ADN de la muestra (restos de sangre, semen, etc.) o por la propia
degradación del ADN (restos cadavéricos). Aunque
se han utilizado polimorfismos del locus HLA o minisatélites,
sin embargo el método PCR se aplica especialmente utilizando
microsatélites (STRs). Por ejemplo, utilizando simultáneamente
cuatro microsatélites de cuatro bases se consigue un poder
de discriminación superior al 99,9 %.
-
Otras aplicaciones forenses de la PCR
La técnica de la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR) se utiliza también en la determinación del
sexo a partir de muestras de ADN, amplificando loci específicos
de los cromosomas sexuales X o Y (por ejemplo, el gen de la
amelogenina).
El análisis del ADN mitocondrial (ADNmt) es especialmente
útil en aquellos casos en los que solamente se disponga
de restos óseos muy antiguos y deteriorados. Como el
ADNmt se transmite sólo por vía materna, puede
ser utilizado cuando se trate de investigar en la reconstrucción
de linajes. Por ejemplo, tal es el caso del estudio de niños
de padres desaparecidos al comparar el ADNmt de los niños
con los de sus presuntos abuelos, tal como ocurrió en
muchos casos ocurridos durante la dictadura militar argentina
(Orrego y col., 1990).
Fue especialmente notable la identificación llevada a
cabo en 1994 de los restos óseos de la familia del último
zar de Rusia (Nicolás II, su mujer Alexandra y tres hijos)
encontrados en una cueva a 35 Km de Ekaterinburgo y que habían
sido asesinados el 16 de Julio de 1918 (Gill y col., 1994).
Incluso se manejó como muestra comparativa la del ADNmt
del actual Duque de Edimburgo (esposo de la reina Isabel de
Inglaterra) emparentado con la familia imperial rusa por vía
materna (bisnieto de la madre de la zarina Alejandra). Su ADNmt
era idéntico al de los supuestos restos de la zarina
y sus tres hijos.
El análisis genético realizado por Gill y colaboradores
utilizó 5 repeticiones cortas en tandem (STR), 2 regiones
hipervariables del ADNmt y la determinación del sexo
de los huesos utilizando el análisis del gen de la amelogenina.
Los resultados científicos fueron congruentes con los
datos históricos de que la familia imperial (el zar Nicolás
II, la zarina Alexandra y tres hijos) fue asesinada junto con
tres sirvientes y el médico de la familia.
|
